Application
Detection of in Utero Cannabis Exposure by Umbilical Cord Analysis
샘플 준비
작성일
2021-06-22 18:13
* Original Source link: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28948698/
Description
Cannabis는 세계에서 가장 오래되고 가장 널리 사용되는 불법 약물 중 하나입니다.
미국내에서는 Cannabis를 사용하는 임산부의 수가 증가하고 있지만 태아 Cannabis 노출의 부작용은 다른 불법 약물로 인한 영향보다 여전히 연구가 적습니다.
태아의 Cannabis 노출은 신경 발달 장애, 저체중 출생, 조산 등을 유발 할 수 있습니다.
그러나 Cannabis 노출이 발달중인 태아에 미치는 영향을 엄격하게 평가하는 연구는 거의 없습니다.
확보 가능한 신생아 표본 (meconium, hair and urine)중 meconium은 임신 3개월 동안 태아 약물 노출을 감지하는 데 사용되는 가장 일반적인 검체 입니다.
하지만 이는 수집이 어려우며 출생 전에는 검사가 어렵습니다.
이러한 이유로 탯줄(umbilical cord)이 자궁 내에서 약물 노출을 검출할 수 있는 대체 표본으로 제안되었습니다.
탯줄은 다른 표본보다 풍부하고, 폐기물로 간주되기 때문에 수집이 용이합니다.
Cannabis 성분 중 활성 물질은 tetrahydrocannabinol이며 대사과정을 거쳐 생성된 주요 대사체는 11-nor-9-carboxy-tetrahydrocannabinol (THC-COOH)입니다.
따라서 생체 대사 물질인 THC-COOH가 Cannabis 흡연 여부를 판단하는 지표 물질로 사용되고 있습니다.
Goal
본 연구의 목적은 delta-9-tetrahydrocannabinol (THC), cannabidiol (CBD) 및 5 개의 THC 대사 산물의 동시 측정을 위한 민감하고 구체적인 방법을 개발하고 검증하는 것입니다.
Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS)가 임신 중 Cannabis에 노출 된 신생아의 실제 탯줄 샘플 분석에 사용되었습니다.
Materials and Methods
<이 부문에서는 샘플 준비에 관한 부분만 다룹니다. 다른 사항은 원 논문 참조 부탁드립니다.>
1. 탯줄 샘플을 ultra-pure water로 헹구어 모체 혈액 등 잔여물을 제거한다
2. 탯줄의 한 부분 (0.5±0.02g)을 작은 조각으로 자른다.
3. 3mL의 메탄올을 첨가하고, 샘플을 5.5m,m/s의 속도로 조직균질기 (OMNI International, TH Tissue homogenizer, USA)를 사용하여 5분 동안 균질화 시킨다.
4. 15분 동안 4 °C에서 4960 rcf 에서 원심분리 한 후, 상층액을 새로운 시험관으로 옮기고 증발기를 사용해 55 °C에서 증발시킨다.
5. 건조된 샘플을 물과 아세토니트릴 (70:30, v/v) 중 0.1% 포름산 혼합물 3mL에 녹인다.
6. 볼텍싱하고, 4 °C, 4960 rcf에서 5분 동안 원심분리 한다.
7. 샘플을 3mL 메탄올 및 3mL 탈이온수로 처리된 카트리지에 로드한다.
8. 샘플을 로딩한 후, 카트리지를 물 중 1% 포름산 2mL 및 물과 메탄올 중 1% 포름산 혼합물 2mL (70:30, v/v)로 세척한다.
9. 카트리지를 진공하에서 10분 동안 건조시킨다.
10. 디클로로 메탄과 이소프로판올 (30:70, v/v)의 혼합물 3mL로 elution 수행하고, 얻어진 샘플을 증발기를 이용해 45 °C에서 증발시킨다.
11. 건조된 샘플을 물과 아세토니트릴 (70:30, v/v)에서 0.1 % 포름산 혼합물 200ml에 녹이고 볼 텍싱 한다.
..
Results
Figure 1. MRM chromatograms of the quantifier (black line) and qualifier (pink line) transitions in blank umbilical cord fortified at the limit of quantification,
1 ng/g for THCCOOH-Glucuronide and THC-Glucuronide, 7 ng/g for THCCOOH, THC and CBD, and 10 ng/g for THC-OH and THC-diOH
Figure 2. MRM chromatograms of the quantifier (black line) and qualifier (pink line) transitions in an authentic umbilical cord sample (sample ID 8) positive for THCCOOHGlucuronide at 4.3 ng/g.
Conclusion
여기서는 LC-MS/MS를 사용하여 탯줄 샘플에서 THC, THC 및 THC-COOH glucuronides을 포함한 대사 산물 및 CBD를 측정하기 위한 구체적인 방법을 개발하고 검증했습니다.
실제 샘플의 분석은 자궁 내에서 Cannabis를 감지하는 데 탯줄의 유용성을 제대로 보여주었습니다.
Copyright © 2017 John Wiley & Sons, Ltd.
Equipment
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• 강력한 125 watt 모터
• 가볍고 인체공학적인 디자인
• 조용한 작동 소음 (72db 이하)
• 빠른 프로브 교체를 위한 커플링 마운트 시스템
• 다양한 속도 조절 (5,000rpm ~ 35,000 rpm)
• Stainless Steel & Plastic Probes 호환
• 처리 범위 : 0.20 mL to 100 mL
Tags
TH, human, umbilical cord, THC, cannabis, LC-MS/MS, pregnancy
Description
Cannabis는 세계에서 가장 오래되고 가장 널리 사용되는 불법 약물 중 하나입니다.
미국내에서는 Cannabis를 사용하는 임산부의 수가 증가하고 있지만 태아 Cannabis 노출의 부작용은 다른 불법 약물로 인한 영향보다 여전히 연구가 적습니다.
태아의 Cannabis 노출은 신경 발달 장애, 저체중 출생, 조산 등을 유발 할 수 있습니다.
그러나 Cannabis 노출이 발달중인 태아에 미치는 영향을 엄격하게 평가하는 연구는 거의 없습니다.
확보 가능한 신생아 표본 (meconium, hair and urine)중 meconium은 임신 3개월 동안 태아 약물 노출을 감지하는 데 사용되는 가장 일반적인 검체 입니다.
하지만 이는 수집이 어려우며 출생 전에는 검사가 어렵습니다.
이러한 이유로 탯줄(umbilical cord)이 자궁 내에서 약물 노출을 검출할 수 있는 대체 표본으로 제안되었습니다.
탯줄은 다른 표본보다 풍부하고, 폐기물로 간주되기 때문에 수집이 용이합니다.
Cannabis 성분 중 활성 물질은 tetrahydrocannabinol이며 대사과정을 거쳐 생성된 주요 대사체는 11-nor-9-carboxy-tetrahydrocannabinol (THC-COOH)입니다.
따라서 생체 대사 물질인 THC-COOH가 Cannabis 흡연 여부를 판단하는 지표 물질로 사용되고 있습니다.
Goal
본 연구의 목적은 delta-9-tetrahydrocannabinol (THC), cannabidiol (CBD) 및 5 개의 THC 대사 산물의 동시 측정을 위한 민감하고 구체적인 방법을 개발하고 검증하는 것입니다.
Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS)가 임신 중 Cannabis에 노출 된 신생아의 실제 탯줄 샘플 분석에 사용되었습니다.
Materials and Methods
<이 부문에서는 샘플 준비에 관한 부분만 다룹니다. 다른 사항은 원 논문 참조 부탁드립니다.>
1. 탯줄 샘플을 ultra-pure water로 헹구어 모체 혈액 등 잔여물을 제거한다
2. 탯줄의 한 부분 (0.5±0.02g)을 작은 조각으로 자른다.
3. 3mL의 메탄올을 첨가하고, 샘플을 5.5m,m/s의 속도로 조직균질기 (OMNI International, TH Tissue homogenizer, USA)를 사용하여 5분 동안 균질화 시킨다.
4. 15분 동안 4 °C에서 4960 rcf 에서 원심분리 한 후, 상층액을 새로운 시험관으로 옮기고 증발기를 사용해 55 °C에서 증발시킨다.
5. 건조된 샘플을 물과 아세토니트릴 (70:30, v/v) 중 0.1% 포름산 혼합물 3mL에 녹인다.
6. 볼텍싱하고, 4 °C, 4960 rcf에서 5분 동안 원심분리 한다.
7. 샘플을 3mL 메탄올 및 3mL 탈이온수로 처리된 카트리지에 로드한다.
8. 샘플을 로딩한 후, 카트리지를 물 중 1% 포름산 2mL 및 물과 메탄올 중 1% 포름산 혼합물 2mL (70:30, v/v)로 세척한다.
9. 카트리지를 진공하에서 10분 동안 건조시킨다.
10. 디클로로 메탄과 이소프로판올 (30:70, v/v)의 혼합물 3mL로 elution 수행하고, 얻어진 샘플을 증발기를 이용해 45 °C에서 증발시킨다.
11. 건조된 샘플을 물과 아세토니트릴 (70:30, v/v)에서 0.1 % 포름산 혼합물 200ml에 녹이고 볼 텍싱 한다.
..
Results
Figure 1. MRM chromatograms of the quantifier (black line) and qualifier (pink line) transitions in blank umbilical cord fortified at the limit of quantification,
1 ng/g for THCCOOH-Glucuronide and THC-Glucuronide, 7 ng/g for THCCOOH, THC and CBD, and 10 ng/g for THC-OH and THC-diOH
Figure 2. MRM chromatograms of the quantifier (black line) and qualifier (pink line) transitions in an authentic umbilical cord sample (sample ID 8) positive for THCCOOHGlucuronide at 4.3 ng/g.
Conclusion
여기서는 LC-MS/MS를 사용하여 탯줄 샘플에서 THC, THC 및 THC-COOH glucuronides을 포함한 대사 산물 및 CBD를 측정하기 위한 구체적인 방법을 개발하고 검증했습니다.
실제 샘플의 분석은 자궁 내에서 Cannabis를 감지하는 데 탯줄의 유용성을 제대로 보여주었습니다.
Copyright © 2017 John Wiley & Sons, Ltd.
Equipment
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• 조용한 작동 소음 (72db 이하)
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• 다양한 속도 조절 (5,000rpm ~ 35,000 rpm)
• Stainless Steel & Plastic Probes 호환
• 처리 범위 : 0.20 mL to 100 mL
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TH, human, umbilical cord, THC, cannabis, LC-MS/MS, pregnancy
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