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유전자 편집 효율을 높이기 위한 GenWand ds DNA Synthesis Services

유전자분석
작성일
2021-11-05 15:40
Now launch the GenWand™ dsDNA HDR Templates

낮은 knock-in 효율은 유전자 치료를 위한 non-viral delivery systems의 주요 단점이었습니다.
이제 GenScript에서 높은 편집 효율과 낮은 독성을 가지는 최적의 솔루션을 제공합니다.

Why closed-end dsDNA as CRISPR Gene Knock-In HDR Templates?
ㆍPCR 제품에 비해 낮은 독성 및 높은 knock-in 효율
ㆍ불필요한 플라스미드 시퀀스 도입 없음
ㆍNHEJ events 를 완화하기 위한 Closed-end
ㆍ긴 시퀀스를 필요로 하는 연구자에 적합
ㆍ대규모 선별 및 스케일 업에 이상적
Why GenWand™ dsDNA Service

ㆍplasmids 기반 생산 공정
ㆍ2~10 kb (ug to g level)
ㆍ불순물 최소화를 위한 종합적인 QC
ㆍendotoxin removal (≤ 10 EU/mg)
ㆍ다양한 연구 단계에 맞게 설계된 품질 등급 (RUO, Preclinical, Basic GMP Grade)

Mechanism of CRISPR HDR based gene editing



CRISPR/Cas9 기술은 일반적으로 표적 DNA 부위에서 정확한 double stranded breaks (DSB)을 만들기 위해 사용됩니다.
가이드 RNA(gRNA)는 Cas9과 복합체를 형성한 후 표적 DNA에 있는 protospacer adjacent motif (PAM) 서열을 인식한 다음 Cas9은 endonuclease 기능을 발휘하여 DSB를 유발합니다.
이는 repair를 위한 2 가지 메커니즘, 즉 DSB 부위에 돌연변이를 일으키는 non-homologous end-joining (NHEJ) 메커니즘을 촉발합니다.
또 다른 메커니즘은 donor DNA가 파손 부위에 삽입되고 유전자 knock-in을 생성할 수 있도록 하는 homology directed repair (HDR)입니다.

이중가닥 DNA (dsDNA)는 전통적으로 HDR donor DNA template로 사용되었지만, 최근의 연구는 단일가닥 DNA (ssDNA 또는 ssODN)가 CRISPR 기반 유전자 삽입, 치환 및 수정에 가장 좋은 HDR 템플릿이라는 것을 보여줍니다.
ssDNA는 특히 Primary cells, stem cells의 editing이나 유전자 변형 동물 모델을 개발하는 과정에서 off-target integration이 감소했을 뿐만 아니라 editing efficiency 와 specificity 가 크게 향상되는 것을 알 수 있습니다.
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