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non-adherent (3D) colony assays 수행시 고려 사항 by GelCount
세포배양
작성일
2021-10-20 16:08
non-adherent (3D) colony assays 수행시 고려 사항 by GelCount
Usable depth of field / Localization of colony layer
현미경과 달리 GelCount는 약 4mm의 DOF를 제공합니다.
colony가 well이나 Petri dish 바닥 위로 4 mm 이하가 되도록 함으로써 최적의 'focussing' 이 가능합니다.
96-well plate의 경우에는 well floor 위로 2mm 이하여야 이상적입니다.
Minimizing the effect of the meniscus in multi-well plates
non-adherent cell type을 포함하는 colony forming assays (부드러운 한천과 같은 반고체 배지의 분석)의 경우,
배양 배지의 표면에 형성된 반월상(meniscus)은 well의 벽 부분이 이미지 주변부에서 보이게 되는 현상을 유발할 수 있습니다.
end-point assays의 경우 영상촬영 직전에 PBS또는 phenol red-free medium로 well을 채워 이러한 렌즈 효과를 쉽게 감소시키거나 제거할 수 있습니다.
이것이 옵션이 아닌 경우 (즉, 배양기로 다시 넣어야 하는 경우),
배지의 양을 더 많이 포함하도록 프로토콜을 조정할 것을 권고합니다. (반월판이 적어도 well의 절반은 차지하도록 해야 함).
아래 이미지는 96well plate에서 반월판을 well의 상단 근처로 이동하는 효과를 보여줍니다.
Colony staining using metabolic cell stains
반고체 배지의 colony의 직경이 50미크론 미만인 경우 콘트라스트를 선택적으로 개선하고 검출 확률을 높이기 위해 colony를 착색하는 것이 유리할 수 있습니다.
이는 세포 증식 분석에 일반적으로 사용되는 'MTT'와 같은 tetrazolium 기반 metabolic stains을 사용하여 효과적으로 수행될 수 있습니다.
본래 무색인 MTT는 살아있는 세포에 의해 흡수되고 미토콘드리아 활성에 의해 청색/보라색 formazan 생성물로 환원됩니다.
중요한 것은, 배지 자체의 색이 영향을 받지 않는다는 것입니다. 그러나 formazan 생성물은 세포 독성을 나타내므로, MTT 염색은 최종단계에서 수행해야 합니다.
다음과 같은 염색 프로토콜을 권장해 드립니다. 각각의 효과는 사용 중인 세포 유형 및 일반적인 배양 조건에 따라 다릅니다.
Other recommendations
Petri dishes 및 multi-well plates의 밑면을 오염시키는 먼지 또는 기타 입자는 GelCount imager의 피사계 심도 범위로 인해 이미지에서 초점이 맞는 물체로 나타납니다.
따라서 샘플의 밑면은 로딩/이미징 직전에 알코올에 적신 보풀이 없는 천으로 닦아 주는 것이 좋습니다
배양 배지에 pH-indicator phenol red가 있으면 이미지의 백그라운드가 증가할 수 있습니다.
그러므로 따라서 허용되는 경우, 페놀 레드가 없는 배지를 사용하는 것이 좋습니다.
GelCount는 플레이트 및 페트리 접시의 lid를 제거하지 않고 멸균 상태 그대로 카운팅이 가능하도록 설계되었습니다.
플레이트/접시 lid의 수분 응결은 일반적으로 최고 해상도(2,400 dpi)에서 작동하거나 양이 많아질 때만 제거하면 됩니다. (미세 '안개'가 아닌 눈에 보이는 물방울)
영상 촬영 전 샘플 플레이트를 일정 시간 동안 실온에 두거나, 무균 상태의 천으로 닦거나, 사용하지 않은 plate/dish의 lid로 교체하여 수분응결을 최소화할 수 있습니다.
마커 펜 등으로 lid에 쓴 글씨는 영상 분석을 방해하므로 당연히 피하는 것이 좋습니다.
Equipment
GelCount Cell colony counter > 상세정보 보러가기
Mammalian cell colony, spheroid, and organoid counter
• Tumor cell의 colony forming assay를 위한 전용 계수기
• Colony imaging, counting and characterizing을 위한 all–in-one system
• 고해상도 이미지 처리-직경 30µm 구별 가능
• 6well x 4 plate 기준 12분내 분석
• 엑셀/이미지 파일로 데이터 전송
• 2D and 3-D배지의 stained/unstained colony counting
• 사용자 편의성을 위한 오프라인 이미지 처리 지원
Applications Field
+ Radiation Biology
+ Chemotherapy
+ Drug Discovery
+ Toxicology
+ clonogenic assays
+ cell survival assays
+ tumour cloning assays
+ colony forming assays
Tags
#셀카운트 #셀카운팅 #세포 계수 # 콜로니카운터 #colony counter #cell counting #세포배양 #cancer #암세포
Usable depth of field / Localization of colony layer
현미경과 달리 GelCount는 약 4mm의 DOF를 제공합니다.
colony가 well이나 Petri dish 바닥 위로 4 mm 이하가 되도록 함으로써 최적의 'focussing' 이 가능합니다.
96-well plate의 경우에는 well floor 위로 2mm 이하여야 이상적입니다.
Minimizing the effect of the meniscus in multi-well plates
non-adherent cell type을 포함하는 colony forming assays (부드러운 한천과 같은 반고체 배지의 분석)의 경우,
배양 배지의 표면에 형성된 반월상(meniscus)은 well의 벽 부분이 이미지 주변부에서 보이게 되는 현상을 유발할 수 있습니다.
end-point assays의 경우 영상촬영 직전에 PBS또는 phenol red-free medium로 well을 채워 이러한 렌즈 효과를 쉽게 감소시키거나 제거할 수 있습니다.
이것이 옵션이 아닌 경우 (즉, 배양기로 다시 넣어야 하는 경우),
배지의 양을 더 많이 포함하도록 프로토콜을 조정할 것을 권고합니다. (반월판이 적어도 well의 절반은 차지하도록 해야 함).
아래 이미지는 96well plate에서 반월판을 well의 상단 근처로 이동하는 효과를 보여줍니다.
 |
 |
| Typical (unfilled) | Well topped up with PBS |
Colony staining using metabolic cell stains
반고체 배지의 colony의 직경이 50미크론 미만인 경우 콘트라스트를 선택적으로 개선하고 검출 확률을 높이기 위해 colony를 착색하는 것이 유리할 수 있습니다.
이는 세포 증식 분석에 일반적으로 사용되는 'MTT'와 같은 tetrazolium 기반 metabolic stains을 사용하여 효과적으로 수행될 수 있습니다.
본래 무색인 MTT는 살아있는 세포에 의해 흡수되고 미토콘드리아 활성에 의해 청색/보라색 formazan 생성물로 환원됩니다.
중요한 것은, 배지 자체의 색이 영향을 받지 않는다는 것입니다. 그러나 formazan 생성물은 세포 독성을 나타내므로, MTT 염색은 최종단계에서 수행해야 합니다.
다음과 같은 염색 프로토콜을 권장해 드립니다. 각각의 효과는 사용 중인 세포 유형 및 일반적인 배양 조건에 따라 다릅니다.
| Protocol A | Protocol B | Protocol C |
| Prepare MTT ((3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) @ 0.5 mg/ml final. Add 100 ul per well (6-well plate or 35 mm Petri dish), 50 ul per well (12-well plate), 25 ul per well (24-well plate) or as appropriate for other plate types. Incubate 1-2 hrs @ 37C. | Prepare Iodonitro-tetrazolium chloride (an MTT variant from Sigma-Aldrich) @ 2 mg/ml. Add 100 ul per well (6-well plate or 35 mm Petri dish), 50 ul per well (12-well plate), 25 ul per well (24-well plate), or as appropriate for other plate types. Incubate overnight @ 37C. | Use the 'WST-1' cell proliferation agent from Roche Molecular Biochemicals according to the manufacturer's instructions in this pdf. |
Other recommendations
Petri dishes 및 multi-well plates의 밑면을 오염시키는 먼지 또는 기타 입자는 GelCount imager의 피사계 심도 범위로 인해 이미지에서 초점이 맞는 물체로 나타납니다.
따라서 샘플의 밑면은 로딩/이미징 직전에 알코올에 적신 보풀이 없는 천으로 닦아 주는 것이 좋습니다
배양 배지에 pH-indicator phenol red가 있으면 이미지의 백그라운드가 증가할 수 있습니다.
그러므로 따라서 허용되는 경우, 페놀 레드가 없는 배지를 사용하는 것이 좋습니다.
GelCount는 플레이트 및 페트리 접시의 lid를 제거하지 않고 멸균 상태 그대로 카운팅이 가능하도록 설계되었습니다.
플레이트/접시 lid의 수분 응결은 일반적으로 최고 해상도(2,400 dpi)에서 작동하거나 양이 많아질 때만 제거하면 됩니다. (미세 '안개'가 아닌 눈에 보이는 물방울)
영상 촬영 전 샘플 플레이트를 일정 시간 동안 실온에 두거나, 무균 상태의 천으로 닦거나, 사용하지 않은 plate/dish의 lid로 교체하여 수분응결을 최소화할 수 있습니다.
마커 펜 등으로 lid에 쓴 글씨는 영상 분석을 방해하므로 당연히 피하는 것이 좋습니다.
Equipment
GelCount Cell colony counter > 상세정보 보러가기
Mammalian cell colony, spheroid, and organoid counter
• Tumor cell의 colony forming assay를 위한 전용 계수기
• Colony imaging, counting and characterizing을 위한 all–in-one system
• 고해상도 이미지 처리-직경 30µm 구별 가능
• 6well x 4 plate 기준 12분내 분석
• 엑셀/이미지 파일로 데이터 전송
• 2D and 3-D배지의 stained/unstained colony counting
• 사용자 편의성을 위한 오프라인 이미지 처리 지원
Applications Field
+ Radiation Biology
+ Chemotherapy
+ Drug Discovery
+ Toxicology
+ clonogenic assays
+ cell survival assays
+ tumour cloning assays
+ colony forming assays
Tags
#셀카운트 #셀카운팅 #세포 계수 # 콜로니카운터 #colony counter #cell counting #세포배양 #cancer #암세포
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